thumb|300px|Un espécime histolóxicu tiñíu, asitiáu ente portaoxetos y cubreobjetos, montáu sobre la platina d'un microscopiu ópticu.
Una tinción o coloración ye una téunica auxiliar utilizada en microscopía p'ameyorar el contraste na imaxe vista al microscopiu. Los colorantes y tinturas son sustancies que usualmente utilizar en bioloxía y medicina pa resaltar estructures en texíos biolóxicos que van ser reparaos cola ayuda de distintos tipos de microscopios. Los distintos colorantes pueden ser utilizaos p'aumentar la definición y esaminar grandes cortes de texíu (resaltando por casu fibres musculares o texíu coneutivu), poblaciones celulares (por casu clasificando distintes célules sanguínees) o inclusive pa resaltar organeles dientro de célules individuales.
En bioquímica, esto implica amestar un colorante específicu (esto significa que s'una de manera selectiva yá sía a ADN, proteínes, lípidos, carbohidratos, etc.) a un sustratu pa cualificar o cuantificar la presencia d'un determináu compuestu. Tanto la tinción como'l marcáu fluorescente pueden sirvir pa los mesmos propósitos.
Distintos tipos de tinciones biolóxiques son utilizaes tamién pa marcar célules en citometría de fluxu y pa marcar proteínes ó acedos nucleicos en electroforesis en xel.
Les tinciones nun tán llindaes al so usu en materiales biolóxicos, tamién pueden ser utilizaes pa estudiar la morfoloxía d'otros materiales (por casu, les estructures lamelares de polímeros semicristalinos de les estructures de dominiu de bloques de copolímeros).
Tinción in vivo y in vitro Una tinción in vivo (tinción vital) ye'l procesu de tiñir texíos vivos. Al provocar que determinaes célules o estructures adquieran los colores de contraste, puede estudiase el so allugamientu y morfoloxía mientres tán desempeñando la so función. El propósitu más común ye revelar detalles de la citoestructura que d'otra manera nun resultaríen evidentes, sicasí, la tinción vital puede revelar amás onde apaez un determináu productu químicu o onde se lleva a cabu una determinada reacción química dientro de les célules o texíos.
De cutiu estes tinciones son llamaes tinciones vitales. Introducir nel organismu mientres les célules entá s'atopen vives. Pa consiguir l'efectu deseyáu, el colorante usualmente utilizar en soluciones bien esleíes que van ente 1:5.000 a 1:50.000. A pesar d'esto les tinciones son eventualmente tóxiques pa los organismos, delles más qu'otres.
Una tinción in vitro o "supravital" arreya'l coloreo de célules o estructures que fueron removíes del so contestu biolóxicu. Utilízase de cutiu una combinación de dellos colorantes pa revelar más detalles y carauterístiques de les que se llograríen col usu d'unu solu. Combinaos con protocolos específicos de fixación y de preparación de muestres, los científicos y profesionales de la salú pueden utilizar estes téuniques estandarizadas como una ferramienta diagnóstica repetible y consistente. Una contratinción ye una tinción que consigue que les célules o estructures sían más visibles, cuando nun se consigue que sían totalmente visibles cola tinción principal.
Por casu, el cristal violeta tiñe namái a les bacteries Gram positives na tinción de Gram. Utilízase una contratinción de safranina (que colorea toles célules), pa dexar tamién la identificación de bacteries Gram negatives.
Ye de notar que munches tinciones pueden ser utilizaes tantu en célules vives como en célules fites.
Métodos de tinción in vitro Preparación Les etapes preparatorias arreyaes nuna tinción van depender del tipu d'analís entamáu; so estes premises puede considerase que dalgunos o toos de los siguientes pasos podríen riquir.
Fixación: de por si, esta etapa puede consistir en dellos pasos. La fixación ye un cambéu de les propiedaes fisicoquímiques de les proteínes que formen una célula o texíu y que tien por finalidá caltener les formes de les célules o texíos tanto como sía posible. Dacuando puede utilizase una fixación por calor pa matar, xuntar y alteriar un espécime de cuenta qu'acepte la tinción. La mayor parte de les vegaes utiliza un fijador químicu. Los fijadores químicos polo xeneral causen la formación d'enllaces cruciaos ente proteínes, o ente proteínes y otres sustancies presentes na muestra, amontando la so resistencia mecánica. Ente los fijadores químicos más comunes atópense'l formaldehídu, etanol, metanol, y/o'l ácidu pícricu. Pequeños bloques de texíu pueden ser enfiñíos en parafina o dalgún polímeru, procesu conocíu como inclusión, p'amontar la so resistencia y estabilidá, y pa faer más fácil cortalos en rodajas desaxeradamente delgaes, yá que cuanto más delgáu ye un tayu histolóxicu, más definición llograr nes imáxenes microscópiques.
Permeabilización esti pasu implica'l tratamientu de les célules con un surfactante nidiu. Esti tipu de tratamientu tien como finalidá eslleir la membrana celular pa dexar que les grandes molécules de colorante puedan aportar a les estructures del interior de les célules.
Montaxe frecuentemente implica xuntar los tayos histolóxicos a un portaoxetos de vidriu pa la so observación al microscopiu o analís. En dellos casos, puede cultivase a les célules direutamente sobre -y portaoxetos. En muestres de célules sueltes, como les que se presenten nun estendíu de sangre o de fluyíos biolóxicos, la muestra puede ser aplicada direutamente sobre'l portaoxetos. Pa pieces de texíu de mayor tamañu, utilízase un micrótomu que corta la muestra en rodajas por demás delgaes. Estes rodajas son depués xuntaes al portaoxetos per mediu d'una sustancia que funciona como pegamento, yá sía una resina tresparente, gelatina o clara de güevu. El montaxe tien por finalidá aumentar la resistencia mecánica d'una muestra que d'otra manera sería desaxeradamente fráxil, por que soporte el procesu de tiñíu calteniendo lo más posible la so estructura orixinal.
Tinción afecha Na so forma más simple, el verdaderu procesu de tinción puede implicar la inmersión de la muestra (antes o dempués de la fixación y el montaxe) na solución colorante, siguíu del esclariáu que ye una llavadura pa esaniciar l'escesu de colorante y la observación. Munchos tintes, sicasí, riquen del usu d'un mordiente, esto ye, un compuestu químicu que reacciona col colorante pa formar un precipitáu coloriáu insoluble. Cuando la solución de colorante por demás esaníciase mientres l'esclariáu, la tinción mordentada permanez.
La mayoría de los colorantes utilizaos en microscopía atópense disponibles como colorantes certificaos. Esto significa que los colorantes ufiertaos pol fabricante fueron evaluaos por un organismu independiente, la Biological Stain Commission, y que esti organismu determinó que'l productu ufiertáu cumple o entepasa ciertos estándares de pureza, concentración de sustancia colorante y desempeñu nes téuniques de tinción emplegaes. Estos estándares son publicaos refechamente na revista Biotechnic & Histochemistry.Penney, D. P., Powers, J. M., Frank, M., Churukian, C. (2002) «Analysis and testing of Biological Stains - the Biological Stain Commission Procedures.» Biotechnic & Histochemistry 77: 237-275. Munchos colorantes presenten una composición distinta ente distintes fabricantes. L'usu de colorantes certificaos esanicia una fonte de resultaos inesperaes.Horobin, R. W., Kiernan JA (2002) Conn's Biological Stains. A Handbook of Dyes Stains and Fluorochromes for Use in Biology and Medicine. 10th ed. Oxford: BIOS. ISBN 1-85996-099-5
Tinción direuta Falamos de tinción direuta cuando'l colorante interacciona direutamente col sustratu, ensin otru tratamientu previu.
Tinción indireuta Denominar d'esta miente a les tinciones que faen usu d'un mordiente. Un mordiente habitual ye'l ácidu tánico.
Afinidá de distintos texíos por distintos colorantes Cuando un texíu o estructura subcelular presenta una afinidá por un determináu colorante suelse designar polos sufixos -filu o -fílico. Por casu, los texíos que se tiñen con azure suelen ser nomaos como azurófilos o azurofílicos. Tamién puede ser utilizáu pa designar propiedaes tintoriales más xeneralizaes, por casu los texíos que se tiñen con colorantes de naturaleza aceda (por casu la eosina) suelen ser denominaos como acidofílicos, basofílicos cuando se tiñen con colorantes de naturaleza básica (tales como por casu l'azul de metileno o la hematoxilina), y anfifílicos cuando acepten dambos colorantes.thefreedictionary.com > amphophilic Citing: Saunders Comprehensive Veterinary Dictionary, 3 ed. 2007 Elsevier, Inc. Otra manera, los texíos cromófobos nun tomen colorante con facilidá.
Tinción negativa Un métodu senciellu de tinción pa bacteries, qu'amás ye un claru casu de cromofobia y que polo tanto funciona inda cuando los métodos de tinción positiva fallen, ye la tinción negativa. Esto pue ser consiguíu a cencielles estendiendo la muestra nun portaoxetos y aplicando direutamente sobre ella una gota de nigrosina o tinta china y cubriendo depués la muestra amugada con un cubreobjetos. Depués d'esto, los microorganismos pueden ser reparaos fácilmente per mediu de microscopía en campu claro como inclusiones clares perbién oldeaes contra'l mediu escuru que les arrodia.Clark, G. (1981) Staining Procedures, 4th ed. p. 412. Baltimore: Williams & Wilkins. Adicionalmente, la tinción negativa ye una téunica nidia que nun destrúi a los microorganismos, dexando polo tanto un recultivo posterior pal estudiu de patóxenos.
Colorantes La mayoría de los colorantes son compuestos orgánicos que tienen dalguna afinidá específica polos materiales celulares. Munchos colorantes utilizaos con frecuencia son molécules cargaes positivamente (cationes) y combínense con intensidá colos constituyentes celulares cargaos negativamente, tales como los ácidos nucleicos y los polisacáridos acedos. Exemplos de colorantes catiónicos son el azul de metileno, el cristal violeta y la safranina. Otros colorantes son molécules cargaes negativamente (aniones) y combínense colos constituyentes celulares cargaos positivamente, tales como munches proteínes. Esos colorantes inclúin la eosina, la fucsina aceda y el rojo Congo. Otru grupu de colorantes son sustancies liposolubles; los colorantes d'esti grupu combinar colos materiales lipídicos de la célula, usándose de cutiu pa revelar la llocalización de les gotículas o depósitos de grasa. Un exemplu de colorante liposoluble ye'l negro Sudán. Si deseyar a cencielles amontar el contraste de les célules pa la microscopía, son abondes los procedimientos simples de tinción. L'azul de metileno ye un bon colorante simple qu'actúa sobre toles célules bacterianes rápido y que nun produz un color tan intensu qu'escureza los detalles celulares. Ye especialmente útil pa detectar la presencia de bacteries en muestres naturales, yá que la mayor parte del material non celular nun se tiñe.
Colorantes histolóxicos más comunes Los distintos colorantes reaccionen o se concentren en distintos partes de les célules o texíos, y estes propiedaes son utilizaes como una ventaya pa revelar partes o árees específiques. Dalgunos de los colorantes biolóxicos más comunes se listan más embaxo. Nun siendo que s'indique lo contrario la mayoría d'estos colorantes utilizar con célules y texíos fitos. Les tinciones vitales (que pueden ser utilizaes con organismos vivos) atópense destacaes.
Azul brilloso de Coomassie Azul de Coomassie (tamién conocíu como Coomassie blue) ye un colorante que tiñe en forma non específica a toles proteínes con un fuerte color azul. Utilízase frecuentemente pa tiñir les corríes de proteínes nes electroforesis en xel.
Azul de metileno El azul de metileno utilizar pa tiñir célules d'animales, pa faer más visibles los sos nucleos. Ye tamién utilizáu pa tiñir los estendíos de sangre pa ser utilizaos en citoloxía y como colorante vital nel recuentu de reticulocitos.
Azul Nilo El Nile Blue o Nile blue A, esto ye, azul Nilo, tiñe los nucleos de color azul. Tamién puede ser utilizáu pa tiñir célules vives.
Bismarck brown